अनुक्रमण से पहले पीसीआर उत्पादों को शुद्ध करना क्यों आवश्यक है?

2024 लेखक: Stanley Ellington | [email protected]. अंतिम बार संशोधित: 2023-12-16 00:17

वांछित का सत्यापन उत्पाद है आवश्यक , जिसमें गैर-विशिष्ट की कमी की पुष्टि करना शामिल है उत्पादों और प्राइमर डिमर। साफ प्रतिक्रिया मिश्रण का -अप भी है ज़रूरी अनिगमित प्राइमरों और डीएनटीपी को हटाने के लिए जो बाद की प्रतिक्रियाओं में हस्तक्षेप कर सकते हैं और एक अपठनीय अनुक्रम को जन्म दे सकते हैं।

इसके अलावा, पीसीआर उत्पादों को शुद्ध करना क्यों आवश्यक है?

आपको पीसीआर उत्पादों को शुद्ध करें अनुपयोगी प्राइमरों, न्यूक्लियोटाइड्स और एंजाइमों से छुटकारा पाने के लिए बंधाव की सफलता को अनुकूलित करने के लिए, जो बनाए रखेगा और अनुक्रमित करेगा उत्पाद का पीसीआर . प्रति शुद्ध NS पीसीआर उत्पाद आकार अपवर्जन क्रोमैटोग्राफी का उपयोग किया जाता है।

कोई यह भी पूछ सकता है कि क्या आपको प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिज पाचन से पहले पीसीआर उत्पादों को शुद्ध करना चाहिए? अधिकांश बंधन एंजाइम सक्रिय होते हैं पीसीआर बफ़र्स क्लोनिंग अनुप्रयोगों के लिए, शुद्धिकरण का पाचन से पहले पीसीआर उत्पाद है ज़रूरी में मौजूद सक्रिय थर्मोफिलिक डीएनए पोलीमरेज़ को हटाने के लिए पीसीआर मिश्रण। डीएनए पोलीमरेज़ कटे हुए डीएनए के सिरों को बदल सकते हैं और बंधाव की उपज को कम कर सकते हैं।

लोग यह भी पूछते हैं कि आप सीक्वेंसिंग के लिए पीसीआर उत्पाद कैसे तैयार करते हैं?

पीसीआर उत्पादों की सीधी अनुक्रमण

1. सुनिश्चित करें कि आपने सही टुकड़ा बढ़ाया है।
2. आपको सभी अवशिष्ट पीसीआर प्राइमरों और अनिगमित न्यूक्लिओटाइड्स को हटाना होगा।
3. यदि पीसीआर प्राइमर्स भी सीक्वेंसिंग प्राइमर होंगे, तो सुनिश्चित करें कि वे हमारी शर्तों से मेल खाते हैं।
4. नमूने पर अधिक ध्यान न दें!

क्या आप पीसीआर उत्पाद को अनुक्रमित कर सकते हैं?

सीधे अनुक्रमण का पीसीआर उत्पाद . अनुक्रमण केवल उपयोग करता है एक में इस्तेमाल किए गए दो के बजाय प्राइमर पीसीआर . यदि तुम करो दोनों प्राइमरों को न हटाएं, आप दो प्राप्त करें दृश्यों एक दूसरे पर आरोपित जो पठनीय नहीं हैं। a. का उपयोग करना ठीक है पीसीआर के लिए प्राइमर अनुक्रमण जब तक यह हमारी परिस्थितियों से मेल खाता है।